在设计酵母单杂交bait时需要考虑两点：顺式作用元件（cis-acting element）和启动子序列。
①使用cis-acting元件：
■ 使用最少数量的cis-acting元件，cis-acting元件超过20bp时会增加非特异性结合。Clontech
检测的最长的单拷贝cis-acting元件为20bp。
■ 如果你的cis-acting元件超过100bp，使用1个或2个拷贝。需要注意的是这么长的片段会提高假
阳性。
②使用启动子序列：
■ bait中不要包含TATA box。
■ 拷贝数：如果启动子序列小于100 bp，使用2个拷贝作为bait。如果超过100 bp，使用1个拷贝
作为bait。
■ 检测假阳性：构建好bait菌株后，检测报告基因的本底表达，以确认任何非特异报告基因激活
（参考操作手册）。
pAbAi空载的多克隆位点中Sma I和Xho I之间存在隐蔽的启动子，这个MCS可以被某些酵母体内蛋白
识别。如果这段识别序列是完整的，pAbAi载体会表现出自激活活性。因此，我们推荐退火后的核苷
酸（插入片段）的3’端带有Sal I了或Xho I酶切位点，而5’端可以是MCS中Sma I位点上游的任意的
单一酶切位点。同时，推荐采用mutant bait做为阴性对照。
页面更新：2015-01-14 11:19:11
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