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自动化高通量的单细胞水平人T细胞受体分析
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Wafergen 640178 1 Chip 询价
Wafergen 640179 1 Chip 询价
Wafergen 640180 5 Chips 询价
Wafergen 640181 10 Chips 询价
Wafergen 640182 Each 询价
SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling系列—
高通量地阐明单细胞中T细胞受体Alpha-Beta链多样性
· 灵敏性更高:基于RACE技术保证低丰度TCR变体的检出
· 特异性更强:获得全长reads,目的reads占比高,更准确的配对信息
· 5’端捕获测序差异表达分析:通过比对5’末端信息,产生所有转录本差异表达数据
· 灵活、高通量的单细胞分析:单次实验同时分析8个样品,生成上千单细胞的测序数据
 
■ 应用领域
· 人单细胞TCR库分析(TCRα和TCRβ克隆型)
· 5’端差异表达分析
 
■ 产品说明
Takara Bio高通量TCR库解决方案结合SMART技术(Switching Mechanism at 5’End of RNA Template)和类似5’RACE的方法,用于捕获由SMARTer ICELL8系统分选得到的上千“活的单细胞”TCR转录本的全部V(D)J可变区域。产生的文库可同时包含α链和β链的多样性信息。
实验流程中,cDNA扩增阶段整合了illumina特异的接头序列,构建的文库带有illumina Indexes,可直接用于illumina平台测序。与此同时,也支持您进行5’末端差异表达分析。需要注意的是,根据您所选择的单细胞分选平台(SMARTer ICELL8 Single-Cell System或者即将发布的SMARTer ICELL8 cx Single-Cell System),实验流程需要选择对应的芯片和collection kit。
在SMARTer ICELL8系统上,与单个T细胞一起被分注到TCR芯片上的还有阳性对照和阴性对照。每个TCR芯片含有5,184个纳升级微孔,预制了1,728个特别的Barcode,同时每个Barcode在芯片上被预制了3次。在用CellSelect软件鉴定出了具有“活的单细胞”微孔后,SMART RT-PCR试剂能被分注到那些被选中为“活的单细胞”的微孔中,用于后续分析。候补孔中带Barcode的cDNA能在芯片上完成PCR扩增,接着将带Barcode的全长扩增子一起从芯片上收集下来。纯化后的cDNA作为第一轮TCR特异性PCR的模板,而第一轮TCR特异性PCR的产物作为第二轮TCR特异性PCR的模板,并整合illumina indexed primer。
 
■ 产品组分
完整的实验流程需要以下产品:
· SMARTer ICELL8 TCR Chip (Code No. 640178)
· SMARTer ICELL8 Human TCR a/b Profiling Reagent Kit (Code No. 640182)
· SMARTer ICELL8 Collection Kit (Code No. 640048)
· SMARTer ICELL8 Loading Kit (Code No. 640109)
· SMARTer ICELL8 Human TCR a/b Profiling - Indexing Primer Set
   (Code Nos. 640179, 640180 & 640181)*
 
* 640179包含的Primer量足够1张芯片使用,若您单次实验使用多张芯片,请购买合适的indexing primer set。640180适用于5张芯片的实验,640181适用于10张芯片的实验。
 
图1 SMARTer ICELL8 Human TCR a/b profiling技术原理流程图
 
图2 SMARTer ICELL8 Human TCR a/b profiling实验流程图
 
图3 采用ICELL8平台对用十四烷酸乙酸大戟二萜醇酯(PMA,phorbol myristate acetate)处理和未处理的CCRF-CEM细胞进行单细胞分选及后续单细胞TCR分析,结果显示PMA处理能增加TCRα克隆型的数量
 
 
产品详情请访问以下英文网页:
https://www.takarabio.com/products/automation-systems/
smarter-icell8-systems/smarter-icell8-applications/human-tcr-profiling-and-5-de