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Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表

■ 说明
使用二种酶同时进行DNA切断反应的双酶切反应是节省实验操作时间的常用手段之一。Takara采用Universal Buffer表示系统,并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性。尽管如此,在进行Double Digestion时,有时还会难以找到合适的Universal Buffer。
本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心,显示了Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中,各Universal Buffer之前表示的 [数字×] 是指各Universal Buffer的反应体系中的最终浓度。Takara销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍,1×时稀释至10倍,2×时稀释至5倍进行使用。
 
■ 注意
◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶,在50 μl的反应体系中,37℃下反应1小时可以完全降解DNA。
◇ 为防止Star活性,请将反应体系中的甘油含量尽量控制在10%以下。
◇ 根据DNA的种类,各DNA的高级结构的差别,或当限制酶识别位点邻接时,有时会发生Double Digestion不能顺利进行。
Enzyme Acc I BamH I Bgl II Cla I EcoR I EcoR V Hinc II Hind III Kpn I Nco I Nde I
Acc I 0.5×K 1×T 1×M 1×M 0.5×K 1×M 1×M 1×M 1×M
+BSA
1×T
BamH I 0.5×K 1×K 1×K 1×K 1×K 0.5×K 1×K 0.5×K 1×K
+BSA
1×K
Bgl II 1×T 1×K 1×H 1×H 1×H 2×K 1×K 1×T 1×K
+BSA
1×H
Cla I 1×M 1×K 1×H 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×H
EcoR I 1×M 1×K 1×H 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×H
EcoR V 0.5×K 1×K 1×H 1×H 1×H 2×T 1×K 0.5×K 1×K
+BSA
1×H
Hinc II 1×M 0.5×K 2×K 1×M 1×M 2×T 1×M 1×M 1×M
+BSA
1×T
Hind III 1×M 1×K 1×K 1×M 1×M 1×K 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×K
Kpn I 1×M 0.5×K 1×T 1×M 1×M 0.5×K 1×M 1×M 0.5×K
+BSA
1×T
Nco I 1×M
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×K
+BSA
Nde I 1×T 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 1×T 1×K 1×T 1×K
+BSA
Not I 0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
Pst I 1×M 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×H
Pvu I 0.5×K 1×K 1×K 1×K 1×K 1×K 0.5×K 1×K 0.5×K 1×K
+BSA
1×K
Sac I 1×M 0.5×K 0.5×K 1×M 1×M 0.5×K 1×M 1×M 1×L 0.5×K
+BSA
1×T
Sal I 1.5×T 1.5×T 1×H 1×H 1×H 1×H 1.5×K 1.5×K 1.5×T
+BSA
1.5×T
+BSA
1×H
Sma I 1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
0.5×K
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
Spe I 1×M 1×K 1×H 1×M 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×H
Sph I 0.5×K 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 2×T 1×K 0.5×K 1×K
+BSA
1×H
Xba I 1×M 0.5×K 2×T 1×M 1×M 2×T 1×M 1×M 1×M 1×M
+BSA
1×T
Xho I 1×M 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K
+BSA
1×H
 
Enzyme Not I Pst I Pvu I Sac I Sal I Sma I Spe I Sph I Xba I Xho I
Acc I 0.5×K
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1.5×T 1×T
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1×M
BamH I 0.5×K
+BSA
1×K 1×K 0.5×K 1.5×T 0.5×T
+BSA
1×K 1×K 0.5×K 1×K
Bgl II 1×H
+BSA
1×H 1×K 0.5×K 1×H 1×T
+BSA
1×H 1×H 2×T 1×H
Cla I 1×H
+BSA
1×H 1×K 1×M 1×H 1×T
+BSA
1×M 1×H 1×M 1×H
EcoR I 1×H
+BSA
1×H 1×K 1×M 1×H 1×T
+BSA
1×H 1×H 1×M 1×H
EcoR V 1×H
+BSA
1×H 1×K 0.5×K 1×H 0.5×K
+BSA
1×H 1×H 2×T 1×H
Hinc II 0.5×K
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1.5×K 1×T
+BSA
1×M 2×T 1×M 1×M
Hind III 0.5×K
+BSA
1×M 1×K 1×M 1.5×K 1×T
+BSA
1×M 1×K 1×M 1×M
Kpn I 0.5×K
+BSA
1×M 0.5×K 1×L 1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1×M
Nco I 0.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
Nde I 1×H
+BSA
1×H 1×K 1×T 1×H 1×T
+BSA
1×H 1×H 1×T 1×H
Not I 1×H
+BSA
2×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
0.5×T
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
Pst I 1×H
+BSA
1×K 1×M 1×H 0.5×T
+BSA
1×H 1×H 1×M 1×H
Pvu I 2×K
+BSA
1×K 0.5×K 1.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K 1×K 0.5×K 1×K
Sac I 0.5×K
+BSA
1×M 0.5×K 1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1×M
Sal I 1×H
+BSA
1×H 1.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
1.5×T
+BSA
1×H 1×H 1.5×T
1×H
Sma I 0.5×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×K
+BSA
1×T
+BSA
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
Spe I 1×H
+BSA
1×H 1×K 1×M 1×H 1×T
+BSA
1×H 1×M 1×H
Sph I 1×H
+BSA
1×H 1×K 0.5×K 1×H 0.5×T
+BSA
1×H 2×T 1×H
Xba I 0.5×K
+BSA
1×M 0.5×K 1×M 1.5×T 1×T
+BSA
1×M 2×T 1×M
Xho I 1×H
+BSA
1×H 1×K 1×M 1×H 1×T
+BSA
1×H 1×H 1×M