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Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 2230A 300 U 260 元
Takara 2230B (A × 5) 1,500 U 1,170 元
 
■ 制品内容
Cloned Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (14 U/μl) 300 U
5 × Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Buffer 1 ml
0.1% × BSA 1 ml
 
■ 制品说明
本酶催化dNTP聚合于单链或双链DNA的3’-OH末端的反应,该反应不需要模板,但引物必须是至少有3个以上碱基的寡核苷酸。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 起源
E. coli carrying the plasmed which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase
 
■ 活性定义
以DNase处理后的热变性小牛胸腺DNA为起始物,在37℃ 、pH7.2的条件下,1小时内使1 nmol的 [3H]dATP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。
 
■ 纯度
1. 15 units的本酶和1 μg的λDNA-Hind III分解物在37℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 15 units的本酶和1 μg 的超螺旋pBR322 DNA在37℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 15 units的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃下反应5小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
 
■ 特性
1. 分子量:60,000。
2. 最适pH:7.2。
3. 辅因子:二价离子Mg2+,Mn2+或Co2+
4. 底物特异性:核酸类似物 (如5-甲基-dCTP,6-O-甲基-dGTP等) 可作为底物。 三磷酸双脱氧胸腺嘧啶和三磷酸虫草菌素为终止物。
 
■ 用途
1. 通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2. 使用dNTP、ddNTP来标记DNA的3’末端。
 
■ 使用注意
1. 影响反应的因素有:添加的碱基种类 (dATP,dTTP,dCTP,dGTP),缓冲液中的二价阳离子(Mg2+,Mn2+,Co2+),DNA末端结构(3’-OH突出末端,平末端,3’-OH凹陷末端)。因此,每个反应都需要摸索最适条件。
2. 对于长度为15-40 bp的核酸链,如果是3’-OH突出末端,dNTPs与DNA的适合摩尔比是20 : 1,如果是3’-OH凹陷末端,dNTPs与DNA的适合摩尔比是100 : 1。
 
 

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