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PrimeScript II High Fidelity One Step RT-PCR Kit
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara R026A 50 次 1,800 元
Takara R026B (A × 4) 200 次 6,500 元
 
■ 制品内容 (Code No.: R026A)
PrimeScript II RT Enzyme Mix 50 μl
PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR 200 μl
2 × One Step High Fidelity Buffer 625 μl × 2
Control F-1 Primer*1 (20 μM) 10 μl
Control R-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl
Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl
RNase Free dH2O 625 μl × 2
   
*1 Positive Control RNA用上游引物。
*2 Positive Control RNA用下游引物。
 
图1. Control RNA: 使用Control Primer时扩增的DNA片段
 
■ 制品说明
PCR(Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应)是一种使用两种引物扩增目的DNA的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用将RNA反转录成cDNA后扩增(RT-PCR),PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
PrimeScript II High Fidelity One Step RT-PCR Kit是在一个反应管中连续进行反应的1 step RT-PCR用试剂盒。反转录酶使用延伸性能好且能够合成全长cDNA的PrimeScript II RTase,PCR使用准确性高且适于扩增长链及GC Rich cDNA的PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase,这两种酶经优化后可用于1 step RT-PCR。
本试剂盒可用于宽泛浓度RNA起始的反应,在反转录反应10分钟、PCR反应延伸时间为10秒/kb的高速条件下,能够扩增难扩增的长链及GC rich等各种目的基因,可简便快速且准确地获得cDNA产物。

本试剂盒具有以下优点:
· 使用单管反应,降低污染的风险,可准确且简便地扩增RNA起始的目的基因。
· 反转录反应只需10分钟,PCR延伸时间达10秒/kb的高速反应。
· 可扩增GC rich、长链cDNA。
· 反应中total RNA的使用量范围广,易于使用。
本试剂盒含有RNA起始合成cDNA及经PCR扩增cDNA所需的全部试剂。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 试剂盒特点
       RNA模板   适用于所有RNA
       扩增片段大小   ~8 kb
       反转录酶   PrimeScript II RTase (使用温度45℃)
       DNA Polymerase   PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR
       RNase Inhibitor   必须使用 (PrimeScript II RT Enzyme Mix 中含有)
1st strand cDNA合成用引物   使用特异性下游引物 (PCR扩增反应用反义链引物)
  (不可使用 Random 6 mers 及 Oligo dT Primer)
       操作   在一个反应管中连续的进行RT-PCR反应
 
■ 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前一定认真阅读。
1. 当同时需要进行多个RT-PCR 反应时,应先配制各种试剂的混合液(Master Mix;其中包括 RNase Free dHH2O、Buffer、dNTP Mixture 等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR等酶类产品时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 2 × One Step High Fidelity Buffer使用前需充分vortex后,离心备用。
4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放入-20℃保存。
5. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融,建议将其分成小包装后冻存。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。
6. 分装试剂时务必使用新的枪头(Tip),以防止样品间污染。
7. 本试剂盒的反转录反应使用基因特异性引物。不要使用Random Primer或Oligo-dT Primer。
 
 
 

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