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TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara R013S 50 次 595 元
Takara R013A 200 次 2,142 元
 
■ 制品内容 (Code No.: R013A : 50 μl反应×200次量)
TaKaRa Taq HS (5U/μl) 50 μl
10 × PCR Buffer for UNG plus*1 (10 ×) 1 ml
dU plus dNTP Mixture*2 (12.5 ×) 800 μl
UNG (2 U/μl) 100 μl
   
*1 Mg2+浓度:22.5 mM (10×)
因dUTP的浓度设定是dTTP的3倍,所以总体dNTP的浓度变高,虽然PCR Buffer中含有MgCl2,但为了保持MgCl2与dNTP量的平衡,本制品中的Mg2+浓度高于TaKaRa Taq Hot Start Version (Code No. R007A)附带的10× PCR Buffer (Mg2+ plus)。
*2 dU plus dNTP Mixture:dUTP 7.5 mM、dATP 2.5 mM、dGTP 2.5 mM、dCTP 2.5 mM
 
 
■ 制品说明
PCR是一种非常敏感的DNA扩增技术,易受污染影响,PCR扩增产物的污染会产生假阳性结果。PCR扩增产物的污染是End-point PCR方法,特别在食品、环境检测中是令人头痛的问题。
本制品是一种可防止假阳性产生的试剂盒。使用本制品是在PCR反应时以dUTP取代dTTP,并同时使用Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Taq HS进行PCR扩增反应。反应液配制后,对含有dU的DNA具有降解作用的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)可选择性水解含有尿嘧啶的PCR产物,而对不含尿嘧啶的模板无任何影响。
UNG的作用原理:在PCR反应前25℃、10分钟反应中,UNG酶可水解PCR反应液中含有尿嘧啶的PCR产物的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,产生脱嘧啶位点。随后进行95℃、2分钟热处理,在UNG酶失活的同时进一步对磷酸骨架水解,从而消除含有尿嘧啶的PCR产物的污染。
UNG酶可以作用于单链或双链DNA,对RNA无活性。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
从反应液的配制到PCR产物的检出应分别在4个操作区操作,操作区推荐进行物理性隔离。
操作区1:反应液的配制及分装。
操作区2:样品的制备。
操作区3:将样品添加到反应液中。
操作区4:PCR反应及凝胶电泳对PCR产物进行检出。
为防止污染,除在操作区4外,请避免对装有PCR扩增产物的tube进行开闭。
 
 

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