收藏我们 在线订购

产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

β-Agarase
品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
Takara 7345 100 U 350 元
 
■ 制品内容
β-Agarase (1 U/μl ) 100 U
10 × β-Agarase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
β-Agarase可以切断琼脂糖【α-L( 1,4)- 3,6-半乳糖酐-β-D( 1,3) 半乳糖多聚体】生成琼脂寡糖。本制品是一种耐高温的琼脂糖酶,反应最适温度为60℃,适合于高温 (60℃) 下的琼脂糖降解反应。本制品适用于DNA片段的切胶回收,将含有DNA片段的琼脂糖凝胶切下后,在再熔解温度下再熔化琼脂糖胶,然后使用本制品降解琼脂糖,再经乙醇沉淀回收目的DNA片段。本制品特别适合于数十kb以上的长片段DNA的切胶回收,且对DNA片段不产生损伤。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 起源
Escherichia coli JM109 carrying plasmid encoding β-Agarase gene from a marine microorganism.
 
■ 活性定义
1个活性单位的定义为:在60℃反应1小时的条件下,降解1% (W/V) 浓度的200 μl熔解后的低熔点琼脂糖生成可溶性琼脂寡糖所需的酶量。
 
■ 纯度
1. 8 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在60℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 8 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在60℃下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 2 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃下反应3小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
4. 1 U、5 U的本酶分别与1 μg的λ-Hind III 片段和1 μg的λ-Pst I 片段在37℃或60℃下反应1小时后,再进行连接再切断实验,确认100%DNA片段能够连接,100%能被再切断,未检测出有3’、5’核酸外切酶活性及磷酸酶活性。
 
■ 用途
β-Agarase可以应用于DNA片段的琼脂糖凝胶回收实验。本制品降解琼脂糖后形成不能再成胶的碳水化合物分子,同时释放DNA片段。这些降解后产生的碳水化合物分子或β-Agarase通常不会影响限制酶酶切反应,DNA的连接转化等。β-Agarase特别适用于从凝胶中纯化大片段 (>50 kb) DNA片段,同时也可以用于小片段DNA的纯化。
 
■ 注意事项
1. β-Agarase对1%以下浓度的琼脂糖凝胶的降解效率较高。
2. β-Agarase对用TAE缓冲液制备的琼脂糖凝胶的降解效果好于用TBE制备的凝胶,对使用TBE制备的凝胶进行降解时,建议酶量加倍。
3. 降解琼脂糖时,β-Agarase的添加量可以根据反应体系、胶浓度、反应时间等相应调整。
4. 回收长片段DNA时,应小心避免物理性损伤。
5. 降解反应后应立即进行离心以除去未被降解的琼脂糖胶块。
6. 进行乙醇沉淀时,建议使用CH3COONH4调整盐浓度,以避免低聚糖与DNA结合。如果DNA片段需要进一步进行5’末端磷酸化或连接反应时,应避免使用CH3COONH4,因为T4 PNK 酶和T4 DNA 连接酶活性会被铵离子所抑制。
7. 可以用1倍异丙醇或2~3倍体积的乙醇进行DNA 沉淀。当回收的凝胶体积较大时建议使用异丙醇进行沉淀。
8. 普通琼脂糖凝胶浓度过高,凝胶再熔会比较困难,建议采用低浓度凝胶。
9. 高温再熔胶容易损伤DNA,建议使用低熔点琼脂糖进行DNA电泳。
 
 

浏览此产品的客户还对以下信息感兴趣