|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Real Time PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。因其无需电泳，且具有快速性及定量性而倍受青睐。本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务，可以提供从引物设计合成开始，至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务，欢迎惠顾！ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 服务项目 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 检测方法 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 嵌合荧光法，双标记荧光探针法，Cycling探针法。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ Real Time PCR装置 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用本公司Thermal Cycler Dice™ Real Time System、Life Technologies公司的ABI 7500 Fast及Roche的Lightcycler 480 II 等多种Real Time PCR装置。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 服务项目说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 定性分析 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 绝对定量 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数) 分析。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 相对定量 (mRNA表达量分析) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 服务要求 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ 如果您需要进行此项服务，请填写“Takara Real Time PCR 检测技术服务委托书”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。 ◇ 进行mRNA表达量分析时，请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA (浓度在500 ng/μl以上，体积在 20 μl以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。 ◇ 如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜，动物细胞数为106以上，动物组织为100 mg以上。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 服务项目示例-以相对定量为例 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 引物设计合成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 具体情况请参见“Oligo DNA/RNA合成服务简要说明”的引物探针设计服务内容。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 如果想进行单独的引物探针设计合成服务，联系电话：0411-87621671-504，E-mail：primer@takara.com.cn。 同时，官网中推出了qPCR引物探针设计工具，供购买Takara qPCR试剂的会员免费使用，详见：Takara qPCR引物探针设计的使用流程。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 制作标准曲线 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用设计合成的引物，以Total RNA反转录的cDNA为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将cDNA进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ Real Time PCR反应及定量分析 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，要对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，最后求得目的基因的相对表达量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 价格 · 交货期 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 报价说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ 以上技术服务报价是以提纯的核酸 (即：DNA或RNA) 为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化时，费用另计。 ◇ 以上技术服务报价是针对采用嵌合荧光法的报价，如果实验采用双标记荧光探针或Cycling探针方法时，相应的探针合成费用另计，价格请具体垂询。 ◇ 以上技术服务报价不包括标准品构建费用，如需进行标准品构建，费用另计，价格请具体垂询。 ◇ 相对定量检测时，客户可选择标准曲线法或双delta法进行数据分析。但如果委托样品数＜ 5 个时，我们会默认为采用双delta 法进行分析，如选择标准曲线法，则需加收500元/基因的标准曲线制作费用。 ◇ 相对定量检测时，以上报价含一组管家基因的校正费用，如需进行多管家基因校正，费用另计，价格请具体垂询。 ◇ 如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
页面更新：2024-04-10 15:58:48
京公网安备 110114000405号